免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其完全覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
別 名 ASV; bHLHe74; c SRC; Class E basic helix-loop-helix protein 74; F SRC 1; Hin 2 protein; Hin2 protein; MGC129719; MGC129720; mNRC 1; NCoA 1; NCoA-1; Ncoa1; NCOA1_HUMAN; Nuclear receptor coactivator 1; Nuclear receptor coactivator protein 1; NY REN 52 antigen; NY REN 52 antigen; p60 Src; pp60c src; Protein Hin 2; Protein Hin 2; Protein Hin-2; Protein Hin2; Proto oncogene tyrosine protein kinase Src; Renal carcinoma antigen NY REN 52; Renal carcinoma antigen NY-REN-52; RIP 160; RIP160; SRC 1; SRC-1; Steroid receptor coactivator 1; v src avian sarcoma (Schmidt Ruppin A 2) viral oncogene homolog.
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
產(chǎn)品名稱
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類固醇受體激活蛋白1抗體0.2ml/200μg
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英文名稱
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Anti-KAT13A/SRC1
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貨號
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LZK63944
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英文名稱 Anti-KAT13A/SRC1
中文名稱 類固醇受體激活蛋白1抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄 表觀遺傳學
蛋白分子量 predicted molecular weight: 59kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KAT13A
亞 型 IgG
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血,家兔、山羊、綿羊可采用采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
生物素標記dUTP溶液(Biotin-11-UTP) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgSciadopitysin
生物素標記dUTP溶液(Biotin-16-UTP ) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGenipin
隨機引物法DNA探針標記試劑盒(A) 規(guī)格:HPLC≥98%;50mgGenipin
隨機引物法DNA探針標記試劑盒(C) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGeniposidic acid
隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒(B) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgGenipin-1-b-D-gentiobioside
填入法DNA末端標記試劑盒(A) 規(guī)格:HPLC≥98%; 20mgPlatycodin D
填入法DNA末端標記試劑盒(B) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgPlatycodin D2
填入法DNA末端標記試劑盒(C) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgCichoric Acid
柱式探針純化試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgTangeretin
轉(zhuǎn)膜 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgIngenol
超快核轉(zhuǎn)膜試劑盒 規(guī)格:HPLC≥98%;100mgPedunculoside
核印跡膜染液 規(guī)格:HPLC≥98%;10mgCaffeine
核雜交 規(guī)格:HPLC≥98%;100mgCaffeic acid
BLOTTO溶液 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgkakoul
Denhardt溶液 規(guī)格:HPLC≥98%;20mgChrysoeriol 7-O-glucoside
轉(zhuǎn)生長子α(TGFα)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
轉(zhuǎn)生長子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
轉(zhuǎn)生長子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
轉(zhuǎn)生長子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Rattus norvegicus (Rat)
組織金屬蛋白酶抑制子3(TIMP3)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
壞死子α(TNFα)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Bos taurus; Bovine (Cattle)
壞死子α(TNFα)檢測試劑盒(學發(fā)光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
人羥脯氨(Hyp)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人羥脯氨糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人橋粒芯糖蛋白1(DGSE1)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人切除修復(fù)交叉互補基1(ERCC1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人青少年2型沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
類固醇受體激活蛋白1抗體0.2ml/200μg人清道夫受體B(SRB/CD36)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人趨子(fractalkine/CX3CL1) ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人自身抗體(IAA)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人原(PI)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人樣生長子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T
人樣生長子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)ELISA試劑盒 規(guī)格:96T/48T