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參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉基因元件Rice Actin 1啟動子PCR試劑盒規(guī)格

貨號：LZR86076

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

需要注意：

PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件：

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）

3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。

二反應的準備： 　　

待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 　　

三、PCR反應： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環(huán)開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。

藤黃英文名稱：Gambogic acid兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

替加氟英文名稱：Tegafur人上皮膜抗原(EMA)ELISA試劑盒 規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光

替卡西林英文名稱：Ticarcillin大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

替拉寧英文名稱：Teicoplanin大鼠狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

替米沙坦英文名稱：Famciclovir人黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光

替尼泊苷英文名稱：Teniposide人抗人絨毛膜激素抗體(AhCGAb)ELISA試劑盒 規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光

替尼泊苷前體英文名稱：Teniposide precursor人抗人類病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒 規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

替唑英文名稱：Tinidazole人糖磷脂酰肌(GPI)ELISA試劑盒 規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光

天冬英文名稱：Asparagus雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒規(guī)格：1g保存：-20℃，避光

天花粉英文名稱：Trichosanthin大鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒規(guī)格：1g保存：-20℃，避光

天麻英文名稱：Gastrodia elata Blume人MAX二聚蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒規(guī)格：0.6g保存：-20℃，避光

天麻素英文名稱：Gastrodin小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒 規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

天名精英文名稱：Carpesium abrotanoides大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 規(guī)格：1g保存：-20℃，避光

天然冰片（右旋龍腦）英文名稱：Natural borneol (dextrobomeol)人半胱蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光

甜菜堿英文名稱：Betaine小鼠巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

1-Boc-piperidine-4-carboxaldehyde,95%大鼠內(nèi)皮型一氧合成酶3(eNOS-3) 進口/國產(chǎn)

2-Amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbo...兔子內(nèi)皮型一氧合成酶3(eNOS-3) 進口/國產(chǎn)

5-Bromo-2-pyridinecarboxaldehyde,95%牛α1性糖蛋白(α1-AGP) 進口/國產(chǎn)

4,6-?Dichloropyrimidine-?5-?carboxalde...人α1性糖蛋白(α1-AGP) 進口/國產(chǎn)

2-(Diphenylphosphino)benzaldehyde小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP) 進口/國產(chǎn)

N-Boc-L-phenylalaninal,97%大鼠α1性糖蛋白(α1-AGP) 進口/國產(chǎn)

(Methylamino)acetaldehyde dimethyl ace...牛結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP) 進口/國產(chǎn)

2,6-Difluorobenzaldehyde,98%人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP) 進口/國產(chǎn)
轉基因元件Rice Actin 1啟動子PCR試劑盒規(guī)格Aspergillus│oryzae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造醬油。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Rhizopus│formosensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造白酒。培養(yǎng)基: CM0017生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于轉化大DNA片段培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bradyrhizobium│japonicum分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 主要用于分類學研究培養(yǎng)基: 63生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Xanthomonas│rubrilineans提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產(chǎn)生Aminocephalosporin synthetase氨基頭孢菌素合成酶培養(yǎng)基: CM0017生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥

Streptomyces│coeruleofuscus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Aspergillus│niger分離基物: 空氣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 311生長條件: 30-35℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Pseudomonas│aeruginosa提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

Actinomadura│madurae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
標準操作步驟：

產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。