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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

嗜線蟲致病桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter humicola

蘇云金芽胞桿菌用途: 用于抗蟲基因的分離和抗蟲相關(guān)基礎(chǔ)研究。

球孢白僵菌用途: 生物防治

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

Bacillus vireti拉丁屬名: Bacillus vireti

猴頭菇拉丁屬名: Hericium erinaceus

青霉拉丁屬名: Penicillium sp.

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

根桿菌拉丁屬名: Rhizobacter fulvus

蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

禾谷絲核菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

根霉屬拉丁屬名: Rhizopus  sp.

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

假單胞菌用途: 用于降解甲萘威
鴕鳥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit進(jìn)口/原裝

phospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 ) 磷酸化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CLU Clusterin / Apolipoprotein J / Apo-J 鼠單抗 (FITC) Human

Rhesus antibody Rh phospho-DAXX (Ser671) 磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白 規(guī)格 0.1ml

尼龍膜(帶正電荷)(15×60cm 0.45um) 1張 Pall-Gelman

ZNF231 英文名稱： 鋅指蛋白231 0.2ml

DDB2 英文名稱： DNA損傷結(jié)合蛋白2 0.1ml

CDAN1 英文名稱： 先天性紅細(xì)胞生成異常性蛋白1 0.2ml

Anti-FOS B FosB蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

TH1/TH2 小鼠細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FABP(brain) CT 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白(C端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MRF/C11orf9 髓鞘基因調(diào)控因子 規(guī)格 0.2ml

MIS/AMH(Human Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone) ELISA Kit 人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素 96T

SLC44A1 英文名稱： 溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1 0.2ml

proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide) 促尿鈉排泄肽前體C抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-AQP7 水通道蛋白-7Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATG4C(Ser166) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C 規(guī)格 0.1ml

山羊抗小鼠 IgG(H+L)/HRP 0.1ml 美國Jackson公司分裝

Uromodulin 英文名稱： TH糖蛋白 0.2ml

DNA polymerase alpha 英文名稱： DNA聚合酶α 0.2ml

Anti-AQP7 水通道蛋白-7Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CXCR7 英文名稱： 細(xì)胞表面趨化因子受體7 0.1ml

Anti-phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-MK6 (Ser202) 磷酸化原活化蛋白激酶MKK6Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Hsp93 植物熱休克蛋白93 規(guī)格 1ml

PM-Scl/PM-1(Human polymyositis-sclerosis antibody) ELISA Kit 人抗多發(fā)性肌炎 96T

PTF1A 英文名稱： 胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A 0.1ml