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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

金黃弗拉特氏菌拉丁屬名: Frateuria aurantia

圍小叢殼注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

雕刻擬盤多毛孢拉丁屬名: Pestalotiopsis carveri

奇異球菌屬拉丁屬名: Deinococcus  sp.

海水甲基桿菌拉丁屬名: Methylobacterium salsuginis

高盧蜜環(huán)菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

千葉鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces chibaensis

釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

郝氏鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces halstedii

香菇8注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

松杉靈芝拉丁屬名: Ganoderma tsugae Murrill

苜蓿中華根瘤菌用途: 與苜蓿結(jié)瘤固氮效果很好

刺芹側(cè)耳注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

假堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus pseudofirmus

鏈霉菌用途: 產(chǎn)抗菌素
鵪鶉源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Anti-Phospho-TAK1 (Thr187)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MK1/MAP2K1(Thr386) 磷酸化原活化蛋白激酶1 規(guī)格 0.1ml

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒英文名稱：human colicin ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒英文名稱：Human Big Endothelin,Big ET ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

人大皰性類天皰瘡(BP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Bullous Pemphigoid,BP ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人單胺氧化酶(MAO)ELISA試劑盒英文名稱：Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

CD3E 英文名稱： CD3/CD3-ε  0.1ml

Anti-IGF II/IGF2 樣生長因子-IIMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

THAA(Human thyroid hormone autoantibodies) ELISA Kit 人甲狀腺非肽激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-IGF1R/CD221 樣生長因子1受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mammaglobin A 珠蛋白1 規(guī)格 0.2ml

BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit 人骨成型蛋白受體Ⅱ 96T

RERE 英文名稱： 肌相關(guān)蛋白1 0.2ml

顆粒蛋白前體 Anti-PGRN 0.1ml

Anti-STAT2/FITC 熒光素標(biāo)記信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MyoD1(Ser200) 磷酸化肌原調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格 0.1ml

GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1) GDNF家族受體α-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒英文名稱：Human aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA Kit特價(jià)促銷

人乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒英文名稱：Human acetylcholine，ACH ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

人乙酰膽堿受體(AChRab)ELISA試劑盒英文名稱：Human acetylcholine receptor antibody，AChRab ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

CT26 英文名稱： /抗原26 0.2ml

Anti-PCNA-Proliferation Marker 增殖細(xì)胞核抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

PSA-U S(Human Ultra Sensitive Prostate Specific Antigen) ELISA Kit 人超敏特異性抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Leptin receptor(L/M/S) 瘦素受體(長、中、短型)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLLN Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白 規(guī)格 0.2ml

Human Pancreastatin ELISA Kit 人胰抑制素 96T

Plasminogen 英文名稱： 纖維蛋白溶酶原 0.1ml