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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

弗雷曲霉Sheep PIINP (Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus fresenii

果生鏈核盤菌Sheep LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

葡萄座腔菌Sheep PLA1 (Phospholipase A1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母Sheep CX43 (Connexin 43) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

哈茨木霉Sheep c-fos ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

產(chǎn)酸克雷伯氏菌Sheep UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Klebsiella  oxytoca

玉米黑粉菌Sheep PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Ustilago maydis

突孢毛殼Sheep GP6 (Glycoprotein VI, Platelet) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium murorum

多粘類芽胞桿菌Sheep CTNNβ1 (Catenin, Beta 1) ELISA Kit 用途: 分類 研究

釀酒酵母Sheep CSF3/GCSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢桿菌Sheep SIGLEC8 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 8) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

阪崎腸桿菌Sheep IL-3 (Interleukin 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Enterobacter  sakazakii

*芽胞桿菌（Bacillus atrophaeus）ATCC 9372；（曾用名：枯草芽胞桿菌黑色變種）Sheep FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit規(guī)格: 10 ml/瓶

核盤菌Sheep MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Sclerotinia sclerotiorum

琉球曲霉Sheep IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus luchuensis
環(huán)紋背帶線蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書大鼠前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit特價(jià)促銷

大鼠素B2(TXB2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Thromboxane B2,TXB2 ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

大鼠調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒英文名稱：Rat thrombomodulin,TM ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Fibrinogen,Fbg ELISA Kit進(jìn)口/原裝

URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal 肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

anti-14-3-3 14-3-3蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Raf (Ser289) 磷酸化原癌基因c-Raf 規(guī)格 0.1ml

CCDC70 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70 0.2ml

Anti-Phospho-FoxO3a (Ser318/321) 磷酸化叉頭蛋白3AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

VEGF-R1 小鼠內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-F1 operon positive regulatory protein(NT) 肺耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MRP1/ABCC1 多藥耐藥相關(guān)蛋白1 規(guī)格 0.1ml

HPRI(Human placental ribonuclease inhibitor) ELISA Kit 人胎盤核糖核酸抑止劑 96T

S100A6 英文名稱： S100鈣結(jié)合蛋白A6 0.1ml

CaIPLA2 英文名稱： 胞漿鈣獨(dú)立磷脂酶A2 0.1ml

Anti-CD328/Siglec-7 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素7Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit進(jìn)口/原裝

小鼠抗中性粒/中心體(ACA)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse anti-centrol and centrosome antibody,ACA ELISA Kit 特價(jià)促銷

小鼠抗中性粒細(xì)胞核周(pANCA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠抗子宮內(nèi)膜(EMAb)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Endometrium Antibody,EMAb ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse granzymes A,Gzms-A ELISA Kit進(jìn)口/分裝

Complement fragment 3c 英文名稱： 補(bǔ)體片段C3c 0.2ml

Anti-FLT-3/CD135 FMS樣酪氨酸激酶3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

mouse Caspase-7 小鼠Caspase-7Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-FLT3 (Tyr591) 磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml

Irna(Human Immune RNA) ELISA Kit 人免疫核糖核酸 96T

Phospho-Smad1 (Ser465) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1 0.1ml