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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

地星FGFR1 (Fibroblast Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 用途: 藥用

鹽沼鹽桿菌AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit拉丁屬名: Halobacterium salinarum

根桿菌屬MIA1 (Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizobacter  fulvus

樟疫霉*sIgA (Secretory Immunoglobulin A) ELISA Kit 拉丁屬名: Phytophthora cinnamomi

釀酒酵母CR (Calretinin) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

pIB139PF4V1 (Platelet Factor 4 Variant 1) ELISA Kit 拉丁屬名: 宿主：DH5α，BL21

龜裂鏈霉菌AST (Aspartate Aminotransferase) ELISA Kit用途: 益生菌

粗糙擬迷孔菌F13A1 (Coagulation Factor XIII A1 Polypeptide) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大囊接霉MF/MPF (Maturation Promoting Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Zygorhynchus macrocarpus

草菇MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大豆慢生根瘤菌NUP37 (Nucleoporin 37kDa) ELISA Kit用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.2生長

鴨疫里氏桿菌MFG-E8 (Milk Fat Globule EGF Factor 8) ELISA Kit拉丁屬名: anatipestifer

鏈狀雙歧桿菌F-TESTO (Free Testoterone) ELISA Kit拉丁屬名: Bifidobacterium catenulatum

略紫鏈霉菌MSMβ (Microseminoprotein Beta) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces violarus

地衣生考克娃酵母TPP1 (Tripeptidyl Peptidase I) ELISA Kit拉丁屬名: Kockovaella lichenicola
犬鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書ATXN3L 英文名稱： 小腦脊髓蛋白3 0.2ml

Anti-Cdc6/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞分裂周期蛋白6IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

iFABP ELISA Kit 大鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Acinus(phospho S1180)/FITC 熒光素標(biāo)記腺泡磷酸化AcinusIgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FGFR3/CD333 成纖維細(xì)胞生長因子受體3 規(guī)格 0.1ml

omentin(Mouse omentin) ELISA Kit 小鼠網(wǎng)膜素 96T

MITF 英文名稱： MITF相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子 0.2ml

CCDC146 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白146 0.2ml

Anti-KIF17 驅(qū)動(dòng)蛋白家族KIF17Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

HO-2(Heme oxygenase 2) 血紅素氧合酶-2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-AATF 拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Thr239) 磷酸化原癌基因c-Jun 規(guī)格 0.1ml

兔抗雞IgG血清 0.5ml 國產(chǎn)

PAG608 英文名稱： 野生型P53誘導(dǎo)基因1 0.1ml

CHST5 英文名稱： 碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶5 0.1ml

Anti-BACE/ASP2 β分泌酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

EMC1 英文名稱： 腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1 0.1ml

鋅指脂蛋白-1b Anti-ZNF268 - middle 0.2ml

Anti-TTF-2/FITC 熒光素標(biāo)記甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α 規(guī)格 0.1ml

Trk C 神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CNOT6 英文名稱： 細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白6 0.2ml

Anti-PEG3 PEG3蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

HCV-IgM(Human Hepatitis C virus IgM) ELISA Kit 人IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Kv1.3/PCN3 離子通道蛋白Kv1.3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh laminin 層粘連蛋白 規(guī)格 0.1ml

BMPR-1A ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受體1A 96T

Pumilio 1 英文名稱： PUM1蛋白 0.2ml