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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

白布勒擔(dān)孢酵母ACO1 (Aconitase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bulleromyces albus

寡養(yǎng)單胞菌BALP (Bone Alkaline Phosphatase) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

印度洋新鞘氨菌FLRT2 (Fibronectin Leucine Rich Transmembrane Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Novosphingobium indicum

粉褶側(cè)耳、粉紅側(cè)耳Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus rhodophyllus  Bres.

果生鏈核盤菌ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

殼菌TPO (Thyroid Peroxidase) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

琉球曲霉FcγR II/CD32 (Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus luchuensis

酮叢毛單胞菌TAP (Trypsinogen Activation Peptide) ELISA Kit拉丁屬名: Comamonas testosteroni

展示接霉sFMC (Soluble Fibrin Monomer Complex) ELISA Kit拉丁屬名: Zygorhynchus exponens

解脂亞羅酵母SOCS3 (Suppressors of Cytokine Signaling 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Yarrowia  lipolytica

柿生假絲酵母EphA2 (Tyrosine protein kinase receptor A2) ELISA Kit拉丁屬名: Candida diospyri

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種F7 (Coagulation Factor Ⅶ) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens

木霉MX1 (Myxovirus Resistance 1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

美澳型核果褐腐病菌ApoE (Apolipoprotein E) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

酵母屬ES-Ab (Anti-Endostatin Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  sp.
都柏林沙門氏菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書beta Glucan Receptor 英文名稱： β葡聚糖受體 0.1ml

Anti-Slug 鋅指轉(zhuǎn)錄因子SlugMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ATR ELISA Kit 大鼠抗凝血酶受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-WNT9A 信號(hào)通路Wnt9aMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GABA Transporter 1/GAT-1 γ氨基丁酸運(yùn)載蛋白1 規(guī)格 0.1ml

G-CSF(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 人粒細(xì)胞集落刺激因子 96T

NAT8B 英文名稱： N-乙酰轉(zhuǎn)移酶8B 0.2ml

Casein kinase 1 gamma 2 英文名稱： 酪蛋白激酶1γ2/casein kinase Iγ1 0.2ml

Anti-PACAP R1/VIP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-IMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

NA(Human Noradrenaline) ELISA Kit 人去甲腎上腺素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Lpin1 protein Lpin1 Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLH 血藍(lán)蛋白 規(guī)格 0.1ml

LH ELISA Kit 大鼠促黃體激素 96T

PGRPS 英文名稱： 肽聚糖識(shí)別蛋白1 0.1ml

phospho-BCAR1(Tyr165) 英文名稱： 磷酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1 0.1ml

Anti-S100A13 S100A13Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Human Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA kit 人抑制因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-SCN1A SCN1AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GRAMD2 GRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2 規(guī)格 0.2ml

Cr ELISA Kit 大鼠骨膠原交聯(lián) 96T

Osteocalcin 英文名稱： 骨鈣蛋白/骨鈣素 0.1ml

CKMT 英文名稱： 酸性線粒體肌酸激酶 0.1ml

Anti-LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Alpha-bungarotoxin, Alpha-BGT ELISA Kit α-銀環(huán)蛇毒素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr351)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CXorf56 X染色體開(kāi)放閱讀框56 規(guī)格 0.2ml

PRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白 0.5mg

phospho-Kv4.2(Thr607) 英文名稱： 磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2 0.1ml