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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱(chēng)即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

奧斯陸莫拉氏菌TLR9 (Toll-Like Receptor 9) ELISA Kit拉丁屬名: Moraxella osloensis

紅緣層孔菌TPO (Thrombopoietin) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

不等彎孢SAP (Serum Amyloid P Component) ELISA Kit拉丁屬名: Curvularia inaequalis

米根霉CAP1 (Adenylate Cyclase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  oryzae

膠韌革菌IGFBP-3 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

金黃色葡萄球菌CX3CL1 (Chemokine C-X3-C-Motif Ligand) ELISA Kit拉丁屬名: aureus

米根霉sTfR1 (Soluble Transferrin Receptor1) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  oryzae

枯草芽孢桿菌DBP (DNA Binding Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

球形節(jié)桿菌CASP 9 (Caspase 9) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter  globiformis

側(cè)孢短芽孢桿菌Ext-N (N-Terminal Extein) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

金色鏈霉菌KLK8 (Kallikrein 8) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces Streptomyces

芽孢桿菌屬PRSS33 (Protease, Serine 33) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  sp.

大杯蕈ICAM-4 (Intercellular Adhesion Molecule-4) ELISA Kit 用途: 食用菌，子實(shí)體可食用

產(chǎn)堿假單胞菌HLE (Leukocyte Exastase)ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas alcaligenes

盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢PL (Pancreatic Lipase) ELISA Kit拉丁屬名: Glomerella cingulata
亞利桑那沙門(mén)氏菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 AKIRIN2 英文名稱(chēng)： AKIRIN2蛋白 0.2ml

Anti-BFGF/FITC 熒光素標(biāo)記堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

OMgp-Ab ELISA Kit 小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-BLNK(p-Tyr96) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人磷酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EPHX2 胞漿環(huán)氧化物水解酶 規(guī)格 0.2ml

sEPCR (Rabbit soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 兔子可溶性內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 96T

MICS1 英文名稱(chēng)： 生長(zhǎng)激素誘導(dǎo)跨膜蛋白(真皮源性蛋白2) 0.2ml

CASC5 英文名稱(chēng)： 易感性候選基因5 0.2ml

Anti-EDG4/LPA2 溶血磷脂酸受體蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit 人載脂蛋白C3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶8Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KCNK TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9 規(guī)格 0.2ml

Human Leishimaria antibody ELISA Kit 人利什曼原蟲(chóng) 96T

PABP 英文名稱(chēng)： 多聚腺苷酸結(jié)合蛋白 0.1ml

UPK3A 英文名稱(chēng)： 尿路上皮特異蛋白3 0.1ml

DLK1 英文名稱(chēng)： 穿膜蛋白DLK1 0.1ml

Anti-AVEN 凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ECE1 英文名稱(chēng)： 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1 0.1ml

粘附分子相關(guān)蛋白a1 Anti-CTNNAL1 0.1ml

Anti-TY3H/FITC (Tyrosine Hydroxylase ) 熒光素標(biāo)記酪氨酸羥化酶IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-HSF1(Ser326) 磷酸化熱休克因子1 規(guī)格 0.1ml

CKLFSF2 isoform 1 英文名稱(chēng)： 趨化素樣因子超家族成員2亞型1 0.2ml

Anti-OAS1 寡腺苷酸合成酶-1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

APCR(Human activated protein C resistance) ELISA Kit 人活化蛋白C抵抗素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-PLC gamma 1 (Ser1248) 磷酸化磷酯酶Cγ1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HHV8/ORF K2 人類(lèi)病毒8 規(guī)格 0.2ml

ET(Mouse endotoxin) ELISA Kit 小鼠內(nèi)毒素 96T

PRRSV-GP5 英文名稱(chēng)： 豬藍(lán)耳病病毒GP5蛋白 0.1ml