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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

霍氏腸桿菌ASB (Arylsulfatase B) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter hormaechei

芽胞桿菌Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  thiaminolyticus

短小芽孢桿菌CETP (Cholesteryl Ester Transfer Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus pumilus

三寶壟根霉RLR (Retinoic Acid Inducible Gene/RIG-Like Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus semaranzensis Takeda

釀酒酵母RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

季也蒙邁耶氏酵母AIG1 (Androgen Induced Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Meyerozyma guilliermondii

薄花邊傘1-5LIPF (Lipase, Gastric) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蛹蟲(chóng)草GAL7 (Galectin 7)  ELISA Kit 用途: 食用、藥用

燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N*TDGF1 (Teratocarcinoma Derived Growth Factor 1) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

皮生毛霉PKCζ (Protein Kinase C Zeta) ELISA Kit 拉丁屬名: Mucor corticola

大腸桿菌ERK2 (Extracellular Signal Regulated Kinase 2) ELISA Kit用途: 教學(xué)科研，將苯酚羥化酶基因克隆至穿梭質(zhì)粒pVK100中，用于苯酚羥化酶基因突變株的互補(bǔ)研究。

產(chǎn)黃青霉NUP205 (Nucleoporin 205kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium chrysogenum

佛雷德里克斯堡假單胞菌PP (Protein Phosphatase) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas  frederiksbergensis

鞘氨盒菌屬IAA (Insulin Autoantibody) ELISA Kit拉丁屬名: Sphingopyxis  wooponensis

黑木耳TNPO2 (Transportin 2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用
羌蟲(chóng)病立克次氏體探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)組織蛋白酶D Anti-cath-D/CD/Cathepsin D 0.1ml

Anti-UCP-1/FITC 熒光素標(biāo)記線粒體脫偶連蛋白1IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-HMGCR(Ser872) 磷酸化三羥基三甲基輔酶A還原酶 規(guī)格 0.1ml

CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

大鼠維生素B12(VB12)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin B12,VB12 ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

大鼠維生素B6(VB6)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin B6,VB6 ELISA Kit特價(jià)促銷

大鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin C,VC ELISA Kit進(jìn)口/原裝

CARD9 英文名稱： 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白9 0.2ml

Anti-EphA4 酪氨酸蛋白激酶A4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

sTNF Alpha-RI(humen) 大鼠可溶性壞死因子-受體1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Death receptor 5/DR5/CD262 細(xì)胞調(diào)亡素/死亡受體5Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NCAM2 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子2 規(guī)格 0.2ml

Human coagulation factor VIII related antigen,F VIII -Ag ELISA Kit 人凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原 96T

SCN10A 英文名稱： 鈉通道蛋白10α 0.2ml

CCDC92 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92 0.2ml

Anti-B7-1/CD80 刺激分子B7-1蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4) 一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Cdc6 細(xì)胞分裂周期蛋白6Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh OPGL/RANKL/ODF 骨保護(hù)蛋白配體(破骨細(xì)胞分化因子) 規(guī)格 0.1ml

CA8 Kit Mouse 小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 ELISA配對(duì) ELISA

TMEM161A 英文名稱： 跨膜蛋白161A 0.2ml

c-Kit 英文名稱： 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原 0.1ml

Anti-Layilin 透明質(zhì)酸受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

NAP(Human neutrophilic alkaline phosphatase0 ELISA Kit 人中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-NMDAR1 (Ser896) 磷酸化谷氨酸受體1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IgHV/IgH 免疫球蛋白重鏈可變區(qū) 規(guī)格 0.2ml

PF-4/CXCL4 ELISA Kit 大鼠血小板因子4 96T

phospho-PI 3 Kinase p110 delta (Tyr524) 英文名稱： 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D 0.1ml