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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

休哈塔假絲酵母c-myc (c-myc Oncogene Product) ELISA Kit拉丁屬名: Candida shehatae H.R.Buckley&Uden

安絡(luò)小皮傘*GAL12 (Galectin 12 ) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希菌CKMT1A (Creatine Kinase, Mitochondrial 1A ) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

假單胞菌屬PCDH1 (Protocadherin 1) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  sp

少根根霉TXB2 (Thromboxane B2) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus arrhizus

大腸埃希氏桿菌FGL2 (Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

枯草芽孢桿菌AGGF1 (Angiogenic Factor with G Patch and FHA Domains 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

*灰葡萄孢DSG-E1 (Desmogleins 1) ELISA Kit用途: 水果保鮮研究

栗褐芽孢桿菌CR2/CD21 (Complement Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus badius

蘋果鏈格孢HB (Hemoglobin) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌SCT (Secretin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

黑曲霉CD23/FcεRII (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus niger

堅菌絲單頂孢 拉丁屬名：Monacrosporium sclerohypha 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

近弧狀短波單胞菌 拉丁屬名：Brevundimonas subvibrioides 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學(xué) 特征特性:菌株呈桿狀，革蘭氏染色為陰性，繁殖方式為裂殖。菌落為圓形，凸起，表面濕潤光滑，邊緣整齊。營養(yǎng)類型為異養(yǎng)，好氧，不需光照。 

斯氏土地桿菌 拉丁屬名：Pedobacter steynii 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學(xué) 特征特性:菌株為呈桿狀，革蘭氏染色為陰性，繁殖方式為裂殖。菌落為圓形，凸起，表面濕潤光滑，邊緣整齊。營養(yǎng)類型為異養(yǎng)，好氧，不需光照。 

單色革蓋菌 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名 ： Cerrena 種名加詞 ： unicolor (Bull.) Murrill 模式菌株 ： 非模式菌株 主要用途 ： 研究；教學(xué) 具體用途 ： 特征特性 ： 子實(shí)體直徑4～8cm，厚0.5cm，扇形，貝殼或平伏而反卷，革質(zhì)。往往側(cè)面相連，表面白色、灰色至淺褐色，有時因有藻類附生呈綠色，有細(xì)長的毛或粗毛和同心環(huán)帶。邊緣薄而銳，波浪狀或瓣裂，下側(cè)無子實(shí)層。菌肉白色或近白色，厚0.1 cm，在菌肉及毛層之間有一條黑線。無菌柄。菌管近白色、灰色，管孔面灰色到紫褐色，孔口迷宮狀，平均每毫米2個，很快裂成齒狀，但靠邊緣的孔口很少開裂。擔(dān)孢子長方形，光滑，無色，(4.5～6)μm×(3～3.5)μm。樺、楊、柳、花楸等樹的伐樁、枯立木、倒木上覆瓦狀排列。分布較廣泛。使樹木侵 

蠟?zāi)?span style="font-size: 16px; font-family: 宋體, SimSun; white-space: pre;"> 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Laccaria 種名加詞：sp.

沙漠奇異球菌 拉丁屬名：Deinococcus deserti 規(guī)格：凍干物 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學(xué) 特征特性:非模式菌株。球形，多聚排列，G+，無芽孢，異養(yǎng)，好氧，不需光照,利用葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麥芽糖、纖維二糖、海藻糖、密二糖、棉子糖、松三糖、可溶性淀粉、D木糖、L阿拉伯糖、乙醇、甘油、核糖醇、D甘露醇、D山梨糖醇、DL乳酸、琥珀酸；不利用肌醇、菊糖；同化肌酸甘油合成研究 

嗜線蟲致病桿菌 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Xenorhabdu 種名加詞：nematophila 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:分類;i:1;s:4:研究;} 特征特性：菌落形態(tài)、大小、質(zhì)地、顏色等:菌落圓形，1-2um,乳白色;液體培養(yǎng)情況:在蛋白凍液體培養(yǎng)基中生長良好;半固體瓊脂培養(yǎng)基中的穿刺生長情況:生長;明膠穿刺培養(yǎng)情況:水解陽性;熒光色素的產(chǎn)生:不產(chǎn)生;其他培養(yǎng)特征:吸收溴百里酚藍(lán)，不吸收中性紅;各種代謝反應(yīng)如：糖、醇的發(fā)酵，牛奶反應(yīng)等:可利用葡萄糖、麥芽糖、甘露糖、纖維二糖、糊精產(chǎn)酸，不能利用果糖、肝糖、蔗糖、甘油、水楊苷、七葉苷等產(chǎn)酸?？梢岳眉姿猁}、乙酸鹽、丙酸鹽、乳酸鹽、丁二酸等，不能利用丙二酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽等；石蕊牛奶還原 、胨化但不凝結(jié);形狀, 大小, 排列:桿狀，散布0.5-1.6x3.1-21.9;運(yùn)動性, 鞭毛:周生鞭毛，運(yùn)動;芽孢, 莢膜:不產(chǎn)生芽孢;革蘭氏染色反應(yīng):陰性;細(xì)胞內(nèi)含物及貯存物:有折射體;繁殖方式:二分裂法

比萊青霉 拉丁屬名：Penicillium bilaiae 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

產(chǎn)氣莢膜梭菌 毒素A型 拉丁屬名：perfringens Type A 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 特征特性中監(jiān)所，C57－15。腸仔豬腸。強(qiáng)毒株，肉肝胃酶消化湯培養(yǎng)物上清注射0.05－0.025ml可致死小白鼠。培養(yǎng)基2或3，35－37℃。

禿裸鏈霉菌 用途：產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Streptomyces 種名加詞：calvus 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:研究;i:1;s:4: ;} 特征特性：孢子絲彎曲；孢子長圓形；不產(chǎn)H2S；產(chǎn)類黑色素；明膠液化快；纖維素上生長；牛奶凝固并胨化；利用L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、鼠李糖、棉子糖、肌醇、D-甘露醇；細(xì)胞壁含有LL-2.6二氨基庚二酸、甘氨酸、葡萄糖、乳糖。 具體用途：產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性

西班牙鹽盒菌 拉丁屬名：Haloarcula hispanica 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

小克銀漢霉C0 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Cunninghamella 種名加詞：echinulata (Thaxt.) Thaxt. ex Blakeslee 主要用途： 具體用途： 特征特性：小孢囊梗從菌絲伸出，直立，分枝，有時有隔膜，頂端形成泡囊，滿生細(xì)刺，上生單細(xì)胞，球形、卵形或洋梨形表面有刺的孢子；孢子可脫落。在高溫下能生長，孢囊根分枝假軸狀、聚傘狀或不規(guī)則，有長刺

Termitomyces bulborhizus 注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Termitomyces 種名加詞：Termitomyces

葡萄座腔菌CYP1B1 (Cytochrome P450 1B1) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

擬黑馬朗假絲酵母LTC4 (Leukotriene C4) ELISA Kit拉丁屬名: Candida pseudohaemulonii

Bacillus aryabhattaiPDGFD (Platelet Derived Growth Factor D) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
圓弧青霉探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格兔吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA Kit 特價供應(yīng)

兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Complement 3,C3 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 干擾素-γ多肽抗原(大、小鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CDC42 細(xì)胞分化周期CDC42蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OMPC 大腸桿菌外膜孔道蛋白C 規(guī)格 0.1ml

CST1 Kit Human 人 Cystatin SN / CST1 ELISA配對 ELISA

CA13 英文名稱： 碳酸酐酶13 0.2ml

Anti-Phospho-LAT (Tyr171) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人極受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-LAMR1 層粘連蛋白受體1(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ITGB4 整合素β4 規(guī)格 0.1ml

EPO ELISA Kit 大鼠紅細(xì)胞生成素 96T

Piccolo 英文名稱： 神經(jīng)細(xì)胞突觸蛋白PCLO 0.2ml

Vinexin 英文名稱： 細(xì)胞間粘附蛋白Vinexin 0.1ml

phospho-DAAM1 (Thr361) 英文名稱： 磷酸化形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1 0.1ml

Anti-ALR 肝再生增強(qiáng)因子Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

EPHB4 英文名稱： 酪酸蛋白激酶受體B4 0.1ml

細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3 Anti-Socs 3 0.2ml

Anti-CD72/Ly-32/FITC 熒光素標(biāo)記CD72IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MAPKAPK2(Ser272) 磷酸化原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2 規(guī)格 0.1ml

CHD3 英文名稱： 染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白3 0.1ml

Anti-URG4 上調(diào)基因4(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Human c-fos ELISA Kit 人c-fosMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-Histone H3 (Thr3) 磷酸化組蛋白3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Metallothionein 金屬硫蛋白 規(guī)格 0.2ml

IDUA(Human Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit 人αL艾杜糖苷酸酶 96T

Retinoic acid induced 17 英文名稱： 維誘導(dǎo)蛋白17 0.2ml