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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

扇形側(cè)耳Cyr61 (Cysteine Rich Protein, Angiogenic Inducer 61) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus flabellatus

粉紅擲孢酵母GM (Gastric Mucin) ELISA Kit拉丁屬名: Sporobolomyces roseus

慢生根瘤菌CD28 (Cluster of Differentiation 28) ELISA Kit 用途: 與胡枝子共生固氮

總狀橫梗霉PTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Lichtheimia ramose

人蒼白桿菌RAG-1 (Recombination Activating Gene 1) ELISA Kit拉丁屬名: Ochrobactrum anthropi

芽孢桿菌DCX (Doublecortin) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus sp.

蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種CLC (Charcot Leyden Crystal Protein) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

乳微桿菌PSA/KLK3 (Prostate Specific Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Microbacterium lacticum

黃河張比齊奧氏菌CgA (Chromogranin A/Pancreastatin) ELISA Kit拉丁屬名: Bizionia  huanghezhanensis SM1212

生活飲用水  氟ADAM9 (A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 拉丁屬名: 生活飲用水  氟

黑曲霉ECM1 (Extracellular Matrix Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  niger

釀酒酵母MIgD (Membrane IgD) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

半園田頭菇COL6 (Collagen Type VI) ELISA Kit用途: 可食

雞傷寒沙門氏菌TNNT1 (Troponin T Type 1, Slow Skeletal) ELISA Kit拉丁屬名: gallinarum

嗜熱脂肪地芽孢桿菌CAD (Caspase Activated Deoxyribonuclease) ELISA Kit拉丁屬名: Geobacillus  stearothermophilus
偽病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒規(guī)格CIDEB 英文名稱： 促進(jìn)凋亡基因 0.2ml

Anti-CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA Kit特價(jià)促銷

小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit進(jìn)口/原裝

小鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA Kit進(jìn)口/原裝

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Crosslaps,Cr ELISA Kit特價(jià)促銷

CAP1 英文名稱： CAP1 0.1ml

Anti-CTSG/CG 組織蛋白酶GMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

MIP-3 Alpha 人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3αMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CRMP2 CRMP2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NLRP7 富含亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7 規(guī)格 0.2ml

Human matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE ELISA Kit 人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白 96T

Phospho-Talin (Ser425) 英文名稱： 磷酸化踝蛋白 0.1ml

URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation) 病毒X蛋白(HBxAg)抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Beta-Actin β-肌動(dòng)蛋白(內(nèi)參)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Raf(Ser259) 磷酸化原癌基因c-Raf 規(guī)格 0.1ml

兔抗大鼠IgG純化 1mg/10mg 國(guó)產(chǎn)

YAP1 英文名稱： 原癌基因Yes相關(guān)蛋白1 0.2ml

DPYD 英文名稱： 二氫嘧啶脫氫酶 0.2ml

Anti-Beta-Actin β-肌動(dòng)蛋白(內(nèi)參)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

CK II alpha 英文名稱： 絲/蘇酸蛋白質(zhì)激酶II α 0.2ml

Anti-E2F1 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

ITAC/CXCL11(Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant) ELISA Kit 人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(兔來(lái)源免疫組化用)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆 規(guī)格 0.1ml

H2-K1(Human Histocompatibility 2-K1-K region) ELISA Kit 人組織相容性2-K1-K 區(qū) 96T

RYBP 英文名稱： 凋亡相關(guān)蛋白1 0.2ml