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客戶(hù)只需提供樣品和待檢測(cè)名稱(chēng)即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

山茶STAT1 (Signal Transducer and Activator of Transcription 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Colletotrichum coccodes

大腸埃希菌PRDX2 (Peroxiredoxin 2) ELISA Kit拉丁屬名: coli

盤(pán)多毛孢屬ACP3/PAP (Prostatic Acid Phosphatase 3) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

食砜節(jié)桿菌OPG (Osteoprotegerin) ELISA Kit 拉丁屬名: Arthrobacter sulfonivorans

松生莖點(diǎn)霉Cyt-C (Cytochrome C) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

煙管菌TI-Ag (Thymus Independent Antigen) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌Dyn (Big Dynorphin) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

果生鏈核盤(pán)菌CAM-Ab (Anti-Calmodulin Specific Antibody) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌(大腸桿菌)PCT (Procalcitonin) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli (Migula) Caslani et Chalmers

弗氏假絲酵母SOX3 (Sex Determining Region Y Box Protein 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida friedrichii

耶特鏈霉菌PKIβ (Protein Kinase Inhibitor Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces yatensis

根瘤菌屬FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizobium herbae

糖化酵母CNTN3 (Contactin 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces diastaticus

類(lèi)干酪乳桿菌GAD (Glutamic Acid Decarboxylase) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  paracasei

扶桑本森頓酵母DNM2 (Dynamin 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Bensingtonia yamatoana
肺孢子蟲(chóng)通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒規(guī)格小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse glycogen synthase kinase,GSK ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit進(jìn)口/原裝

小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit特價(jià)促銷(xiāo)

Beta2-Microglobulin 人β2微球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-P450 1A2/CYP1A2 細(xì)胞色素P450 1A2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NFAT5 活化T細(xì)胞核因子5蛋白 規(guī)格 0.2ml

Cadherin like 23 英文名稱(chēng)： 鈣粘蛋白23 0.2ml

Anti-GDF8 羊抗生長(zhǎng)分化因子8/肌肉抑制素Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CCP(Human anti-cyclic citrullinated peptide) ELISA Kit 人抗環(huán)胍氨酸肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-IL-26/AK155 白介素26Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRRC4B/NGL3 神經(jīng)突觸蛋白NGL3 規(guī)格 0.2ml

ADRP(Human adipose differentiation-related protein) ELISA Kit 人脂肪分化相關(guān)蛋白 96T

phospho-RPS6KB1(Thr 412) 英文名稱(chēng)： 磷酸化核糖體S6蛋白激酶 0.1ml

大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Rat macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit特價(jià)促銷(xiāo)

大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Rat macrophage inflammatory protein 3α,MIP-3α ELISA Kit進(jìn)口/原裝

大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Rat macrophage inflammatory protein 3β,MIP-3β ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

大鼠巨噬細(xì)胞蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Rat macrophage inflammatory protein 1α,MIP-1α ELISA Kit特價(jià)促銷(xiāo)

大鼠巨噬細(xì)胞蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Rat macrophage inflammatory protein 1β,MIP-1β ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

FN(Mouse Fibronectin) ELISA Kit 小鼠纖連蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CCL23/MPIF-1/FITC 熒光素標(biāo)記因子1IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CHMP7 英文名稱(chēng)： 染色質(zhì)修飾蛋白CHMP7 0.1ml

Anti-ICOS-L/B7-H2/CD275 誘導(dǎo)協(xié)同刺激分子配體CD275Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

VEGF-R2 小鼠內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-F1 operon positive regulatory protein(CT) 肺耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(C端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MRGX1/MRGPRC/SNSR G蛋白偶聯(lián)受體MRGX1 規(guī)格 0.1ml

FETU-A(Human Fetuin A) ELISA Kit 人胎球蛋白A 96T

SLC20A2 英文名稱(chēng)： 溶質(zhì)載體蛋白家族20成員2 0.2ml