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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

聚紅粉端孢霉OSF (Osteoclast Stimulating Factor 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

紅色蠟?zāi)?/span>PKIγ (Protein Kinase Inhibitor Gamma) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

香港洛克氏菌ERK1 (Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Loktanella hongkongensis

白僵菌ACP3/PAP (Prostatic Acid Phosphatase 3) ELISA Kit用途: 害蟲生物防治

長蠕孢菌FSTL1 (Follistatin Like Protein 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

F11 (Coagulation Factor XI) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

AquimonasPKCε (Protein Kinase C Epsilon ) ELISA Kit拉丁屬名: Aquimonas   sp/

Microbacterium marinilacusGAD-Ab (Anti-Glutamic Acid Decarboxylase antibody) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

變異鏈霉菌DNM1 (Dynamin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces variabilis

干草鞘氨單胞菌Cyt-C (Cytochrome C) ELISA Kit拉丁屬名: Sphingomonas faeni

蠟狀芽孢桿菌GPLD1 (Glycosylphosphatidylinositol Specific Phospholipase D1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

枯草芽胞桿菌GDF3 (Growth Differentiation Factor 3) ELISA Kit 用途: 產(chǎn)蛋白酶

產(chǎn)堿普羅威登斯菌BGN (Biglycan) ELISA Kit拉丁屬名: Providencia alcalifaciens

假單胞菌PGM (Phosphoglucomutase) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas sp.

鹽假單胞菌CBX3 (Chromobox Homolog 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas salina
牛眼莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格VGLL3  轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白3抗體陶塔二酚Totaradiol對照藥材 分 子 式: C20H30O2 分 子 量: 302.451

VGLL4  轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4抗體雷酚內(nèi)酯Triptophenolide中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C20H24O3 分 子 量: 312.4

SIP1  Smad蛋白相互作用蛋白1抗體臺氏液粉劑(Tyrode's Solution)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PTPH1/PTPN3  蛋白酪氨酸磷酸酶H1抗體喬松素Pinocembrin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H12O4 分 子 量: 256.25

PROCA1  Cyclin A1相互作用蛋白抗體落葉松樹脂醇3-Furanmethanol,tetrahydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-4-[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]-,(2S,3R,4R)-對照藥材 分 子 式: C20H24O6 分 子 量: 360.40096

ZNF354C  鋅指蛋白354C抗體五味子乙素Gomisin A中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C23H28O7 分 子 量: 416.46422

SLFN14  Schlafen家族14抗體大薊苷Pectolinarin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C29H34O15 分 子 量: 622.57