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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

異常漢遜酵母ABCG2 (ATP Binding Cassette Transporter G2) ELISA Kit 拉丁屬名: Hansenula  anomala

巨大芽胞桿菌NPHN (Nephrin) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

秦氏蜜環(huán)菌OXA (Orexin A) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃孢平革菌AR (Androgen Receptor) ELISA Kit用途: 產(chǎn)胞外NADH過(guò)氧化物酶(produces extracellular NADH-oxidizing peroxidase) 合成及降解3、4-二甲氧苯甲基乙(synthesis and degradation of veratryl alcohol ) 轉(zhuǎn)變甘油三硝酸酯為一硝酸酯(converts glyceryl trinitrate to glyceryl 2-mononitrate) 降解2,4,5-T (degrades 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid (2

假根蘑菇AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽胞桿菌MAP-2 (Microtubule Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌NUP50 (Nucleoporin 50kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌Bcl2L11 (Bcl-2 Like Protein 11) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

相思根瘤菌MAG Ab (Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌OBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

大腸埃希菌PYY (Peptide YY) ELISA Kit拉丁屬名: coli

產(chǎn)氣莢膜梭菌       毒素C型NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 拉丁屬名: perfringens       Type C

韌革菌屬OCLN (Occludin) ELISA Kit  拉丁屬名: Stereum sp.

Lysinibacillu xylanilyticusPCDHγA2 (Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

陰溝腸桿菌ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter cloacae subsp. cloacae
溶血性曼氏桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒供應(yīng)商YES1  原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體蒿草酚A[3,4'-Bibenzofuran]-6,6'-diol,3'-(3,5-dihydroxyphenyl)-4-[(2S,3S,4R,5S)-4-(3,5-dihydroxyphenyl)tetrahydro-2,5-bis(4-hydroxyphenyl)-3-furanyl]-2,2',3,3'-tetrahydro-2,2'-bis(4-hydroxyphenyl)-,(2S,2'R,3S,3'R)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C56H44O13 分 子 量: 924.940760000001

phospho-YES1(Tyr426)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體托品醇異丁酯Propanoic acid,2-methyl-, (3-endo)-8-methyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yl ester化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C12H21NO2 分 子 量: 211.30064

phospho-YES1(Tyr537)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體柳杉酚； 10-脫氧代黃檜醇9(1H)-Phenanthrenone,2,3,4,4a,10,10a-hexahydro-6-hydroxy-1,1,4a-trimethyl-7-(1-methylethyl)-,(4aS,10aS)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H28O2 分 子 量: 300.43512

Anthrax  炭疽桿菌抗體棕櫚酸乙酯Ethyl palmitate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C18H36O2 分 子 量: 284.47724

Anthrax  炭疽菌抗體（采用活疫苗制備）(24Z)-3,4-開(kāi)環(huán)甘遂-4(28),7,24-三烯-3,26-二酸3,4-Secotirucalla-4(28),7,24-triene-3,26-dioic acid化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

SARM1  SARM1蛋白抗體牡荊素葡萄糖苷Glucosyl-vitexin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C27H30O16 分 子 量: 610.5175

SAMD9  SAMD9蛋白抗體8-氧黃連堿2,3,9,10-dimethylenedioxy-8-oxoprotoberberine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C19H13NO5 分 子 量: 335.31