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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶(hù)只需提供樣品和待檢測(cè)名稱(chēng)即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

大肥菇Monkey GZMK (Granzyme K) ELISA Kit拉丁屬名: Agaricus bitorquis

慢生根瘤菌Monkey TMPRSS2 (Transmembrane Protease, Serine 2) ELISA Kit 用途: 與花生共生固氮良好

球孢白僵菌Monkey MYD88 (Myeloid Differentiation Factor 88) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

解淀粉鹽盒菌Monkey ALCAM (Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit拉丁屬名: Haloarcula amylolytica

香菇Monkey BMPR2 (Bone Morphogenetic Protein Receptor II) ELISA Kit拉丁屬名: Lentinula  edodes

異常漢遜酵母異常變種Monkey TNNC2 (Troponin C Type 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Hansenula  anomala var. anomala

榮州假黃單胞菌Monkey TSH (Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudoxanthomonas  yeongjuensis

釘斑鏈霉菌Monkey AChRab (Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces clavifer

赭蓋紅菇Monkey FGF9 (Fibroblast Growth Factor 9) ELISA Kit 用途: 可食用，與松、云杉等樹(shù)木形成外生菌根

球孢枝孢Monkey TPS (Tissue Polypeptide Specific Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Cladosporium sphaerospermum

芽枝狀枝孢Monkey IgG1 (Immunoglobulin G1) ELISA Kit拉丁屬名: Cladosporium cladosporioides

金黃色葡萄球菌 Monkey PDHα (Pyruvate Dehydrogenase Alpha) ELISA Kit 拉丁屬名: Staphylococcus aureus

新月彎孢Monkey Anti-AChR (Anti-Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Curvularia lunata

釀酒酵母Monkey ARHGDIα (Rho GDP Dissociation Inhibitor Alpha ) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

耐賴(lài)氨酸芽孢桿菌Monkey CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) ELISA Kit拉丁屬名: Lysinibacillus  boronitolerans
單純病毒2型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 TPTE  /睪丸抗原44抗體愈創(chuàng)甘油醚3-(2-Methoxyphenoxy)-1,2-propanediol中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C10H14O4 分 子 量: 198.22

ALDH16A1  乙醛脫氫酶16家庭A1抗體莫諾苷Morroniside中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C17H26O11 分 子 量: 406.38

ALG11  天門(mén)冬酰胺連接糖基化11抗體矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷Cyanidin-3-glucoside chloride中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H21ClO11 分 子 量: 484.84

ALS2CR4  肌萎縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體當(dāng)歸酸酐2-Butenoic acid,2-methyl-, anhydride, (2Z,2'Z)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C10H14O3 分 子 量: 182.21636

AMIGO3  粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體脫氫雌馬酚3-(4-Hydroxyphenyl)-2H-chromen-7-ol中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H12O3 分 子 量: 240.25398

AMN1  細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體Earle's平衡鹽粉劑(1×EBSS,無(wú)鈣鎂糖酚紅)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ANKRD11  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體慶大霉素硫酸鹽Gentamycin Solution化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C21H43N5O7.H2O4S 分 子 量: 575.6739