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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶(hù)只需提供樣品和待檢測(cè)名稱(chēng)即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

赭鱗蘑菇Monkey S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit用途: 可食、藥菌

產(chǎn)氣腸桿菌Monkey ICAM-4 (Intercellular Adhesion Molecule-4) ELISA Kit 拉丁屬名: Enterobacter aerogenes

簇生黃韌傘Monkey EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor)ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

粉紅單端孢Monkey PSA/KLK3 (Prostate Specific Antigen) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

灰樹(shù)花Monkey CX26 (Connexin 26) ELISA Kit 用途: 食用菌

大腸埃希氏桿菌Monkey P-CK (Pan-Cytokeratin) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

華麗側(cè)耳（佛羅里達(dá)側(cè)耳）Monkey C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus floridanus

蘑菇Monkey MCSFR (Macrophage Colony Stimulating Factor Receptor) ELISA Kit用途: 食用

紅冬孢酵母Monkey CAPA (Cytotoxin Associated Protein A) ELISA Kit拉丁屬名: Rhodosporidium toruloides

 寇氏隱甲藻Monkey OBTF4 (Octamer Binding Transcription Factor 4) ELISA Kit拉丁屬名: Crypthecodinium cohnii

三葉草根瘤菌Monkey NTRK2 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2 ) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌Monkey PCDH15 (Protocadherin 15) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

靈芝Monkey SIGLEC1 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

腸膜明串珠菌Monkey DAP6 (Death Associated Protein 6) ELISA Kit拉丁屬名: Leuconostoc mesenteroides

假單胞菌Monkey VIM (Vimentin) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas yamanorum
病毒通用型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 TBRG4  轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β調(diào)節(jié)蛋白4抗體偽石蒜堿1H-Pyrrolo[3,2,1-de]phenanthridine-1,2,10-triol,2,4,5,7,11b,11c-hexahydro-9-methoxy-, (1S,2S,11bS,11cS)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C16H19NO4 分 子 量:

TLK2  絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體木蘭脂素Magnoline中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C36H40N2O6 分 子 量:

ANKRD28  錨蛋白重復(fù)域28抗體前胡香豆素E2-Butenoic acid,2-methyl-,(9R)-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2,10-dioxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-9-ylester, (2E)- (9CI)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C19H18O6 分 子 量:

SIPA1L2  信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體西紅柿堿Tomatine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C50H83NO21 分 子 量: 1034.18812

DUSP7  雙特異性蛋白磷酸酶7抗體補(bǔ)骨脂香豆素AFicusin A對(duì)照藥材 分 子 式: C25H24O5 分 子 量: 404.45506

PPM1B  蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體（PP2Cβ）western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×,尼龍膜)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PPM1G  蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體（PP2Cγ）北美芹素2-Butenoic acid,2-methyl-,(9R,10R)-9-(acetyloxy)-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-10-ylester, (2Z)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H22O7 分 子 量: 386.39518