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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

斜臥青霉TUBβ (β-Tubulin) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium decumbens

大腸埃希菌LXA4 (Lipoxin A4) ELISA Kit拉丁屬名: coli

果蔬汁 三唑磷、、磷、 乙酰磷RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 拉丁屬名: 果蔬汁 三唑磷、、磷、 乙酰磷

細(xì)致交鏈孢PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

熱帶假絲酵母IRAK3 (Interleukin 1 Receptor Associated Kinase 3) ELISA Kit拉丁屬名: Candida tropicalis

大腸埃希氏菌PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 ) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

木葡萄球菌PSPN (Persephin) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus xylosus

滑菇PGC (Pepsinogen C) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淺綠黃假單胞菌CCL14 (Chemokine C-C-Motif Ligand 14) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas viridiflava

蜜二糖假絲酵母RARS (Arginyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁屬名: Candida melibiosica

黑木耳APAF-1 (Apoptosis Protease Activating Factor-1) ELISA Kit拉丁屬名: Auricularia  auricula

枯草芽孢桿菌MPF (Maturation Promoting Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

平田頭菇6-2ES-Ab (Anti-Endostatin Antibody) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淺灰鏈霉菌AAA (Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces griseolus(Waksman) Waksman et Henrici

鴨肝炎病毒FGL1 (Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Duck hepatitis virus
貓病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書HSPBAP1  熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體5-烯丙基-1,2,3-三甲氧基苯5-Allyl-1,2,3-trimethoxybenzene化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C12H16O3 分 子 量: 208.25364

C12orf23  *2號染色體開放閱讀框23抗體細(xì)交鏈孢菌酮酸2H-Pyrrol-2-one,3-acetyl-1,5-dihydro-4-hydroxy-5-[(1S)-1-methylpropyl]-, (5S)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C10H15NO3 分 子 量: 197.231

RUBISCO  核酮糖1,5二磷酸羧化酶抗體去氫松香酸1-Phenanthrenecarboxylicacid, 1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-1,4a-dimethyl-7-(1-methylethyl)-,(1R,4aS,10aR)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C20H28O2 分 子 量:

G6PDH/H6PD  己糖6磷酸脫氫酶抗體4-苯基瑞香素7-甲基醚7-methoxy-8-hydroxy-4-phenylcoumarin化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C16H12O4 分 子 量: 268.26408

γ-Catenin  γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體S23906-1(±)-cis-1,2-Bis(acetoxy)-6-methoxy-3,3,14-trimethyl-2,3,7,14-tetrahydro-1H-benzo[b]pyrano[3,2-h]acridin-7-one化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C28H27NO7 分 子 量: 489.52989

Thrap3/TRAP150  甲狀腺激素受體相關(guān)蛋白3抗體杯莧甾酮Cyasterone中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C29H44O8 分 子 量: 520.65

PRMT5  組蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5抗體α-細(xì)辛腦alpha-Asarone化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C12H16O3 分 子 量: 208.25