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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

德爾布有孢酵母cADPRH/CD38 (Cyclic ADP Hydrolase) ELISA Kit拉丁屬名: Torulaspora delbrueckii

釀酒酵母ATF-1 (Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

腐殖質(zhì)鏈霉菌TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Xanthomonas arboricola

絲衣霉菌CR2/CD21 (Complement Receptor 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

美澳型核果褐腐病菌sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

阿克蘇海洋桿菌GPR37 (G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit拉丁屬名: Pontibacter akesuensis

綠色木霉FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma viride

阮氏菌MCP-2/CCL8 (Monocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Ruania   sp.

枯草芽孢桿菌PAP (Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

構(gòu)巢曲霉PLA2G4D (Phospholipase A2, Group IV D) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus nidulans

殼菌ACHAP (Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit用途: 用于該菌種群遺傳學(xué)研究及與蘋果輪紋、干腐、楊梅和石榴流膠、獼猴桃腐爛等病菌系統(tǒng)學(xué)研究

巴斯德酵母MBLR (Mannose Binding Lectin Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces pastorianus

博伊丁假絲酵母MAT (Matrilysin) ELISA Kit拉丁屬名: Candida boidinii

史氏芽孢桿菌MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  smithii

長枝木霉KNG1 (Kininogen 1) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma  longibrachiatum
艾美耳球蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商BAZ/ACF1  溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體3-(4-羥基苯基)-1-丙醇3-(4-Hydroxyphenyl)-1-propanol對照藥材 分 子 式: C9H12O2 分 子 量: 152.19038

FAS/Apo-1/CD95  載脂蛋白1抗體荷花山桂花糖 AArillatose-B對照藥材 分 子 式: C22H30O14 分 子 量: 518.4652

CPE  胰羧肽酶E抗體麥冬甲基黃烷酮AMethylophiopogonanone A中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C19H18O6 分 子 量: 342.34262

Myotilin  肌收縮蛋白MYOT抗體啤酒甾醇Ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol,(3b,*,6b,22E)-對照藥材 分 子 式: C28H46O3 分 子 量: 430.66304

PMCA  細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運ATP酶抗體根皮素Phloretin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H14O5 分 子 量: 274.27

GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基丁酸受體α3抗體RNA保存液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NCEH/AADACL1  中性膽固醇酯水解酶1抗體柴胡皂苷CSaikosaponin C中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C48H78O17 分 子 量: 927.12