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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

冷溫木拉克酵母Pg (Progesterone) ELISA Kit拉丁屬名: Mrakia frigida

枯草芽孢桿菌PGR (Progesterone Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

蠟狀芽孢桿菌FSTL1 (Follistatin Like Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

蘇云金芽孢桿菌PHB (Prohibitin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

束狀刺盤孢*PI (Proinsulin) ELISA Kit拉丁屬名: Colletotrichum dematium (Persoon :Fries) Grove

白被黑蛋巢PK2 (Prokineticin 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Cyathus pallidus

擬囊體側耳、(鮑魚菇)PKR1 (Prokineticin Receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus cystidiosus  Miller

辣椒枯萎PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium oxysporum

紅大耳GZMK (Granzyme K) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母PRCP (Prolylcarboxypeptidase) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

紅色瑞恩氏酵母PGD2S (Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA Kit拉丁屬名: Ruinenia rubra

雞傷寒沙門氏菌EP2 (Prostaglandin E Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: gallinarum

秦氏蜜環(huán)菌PTGES2 (Prostaglandin E Synthase 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

丁香假單胞桿菌番茄致種*PTGES (Prostaglandin E Synthase, Microsomal) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

紅硬囊果青霉NRG-1 (Neuregulin 1) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium rubidurum
刺激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 MTSS1  轉移抑制蛋白1根皮苷Phlorizin中藥標準品  分 子 式: C21H24O10 分 子 量: 436.41

MTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor  緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體焦亞硫酸鈉溶液(100×)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NIT1  腈水解酶1抗體蕊木堿甲酯Methyl chanofruticosinate對照藥材 分 子 式:  分 子 量:

RASSF3  Ras相關區(qū)域家族1A抗體咖啡酸二十二酯Docosyl 3-(3,4-dihydroxyphenyl)acrylate對照藥材 分 子 式: C31H52O4 分 子 量: 488.74218

NPR2L/G21 protein  G21蛋白質抗體瓦來薩明堿 N-氧化物2,5-Ethano-2H-azocino[4,3-b]indole-6-carboxylicacid, 4-ethylidene-1,3,4,5,6,7-hexahydro-6-(hydroxymethyl)-, methyl ester,2-oxide, [5S-(4E,*,6b)]- (9CI)對照藥材 分 子 式: C20H24N2O4 分 子 量:

XAB2/SYF1  XAB2蛋白抗體蘋果酸DL-Malic acid中藥標準品  分 子 式: C4H6O5 分 子 量: 134.08744

PDGFRL  血小板源性生長因子受體β樣蛋白抗體甘草查爾酮C2-Propen-1-one,3-[4-hydroxy-2-methoxy-3-(3-methyl-2-buten-1-yl)phenyl]-1-(4-hydroxyphenyl)-,(2E)-中藥標準品  分 子 式: C21H22O4 分 子 量: 338.39698