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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

灰色筍殼菌CKLFSF7 (Chemokine Like Factor Superfamily 7) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

疣梗青霉CKLFSF8 (Chemokine Like Factor Superfamily 8) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium verrucosum

分散泛菌CCKAR (Cholecystokinin A Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Pantoea dispersa

島籃狀菌CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Talaromyces  islandicus

球毛殼菌CETP (cholest erolester transfer protein) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium globosum Kunze

小孢根霉PC/CPG (choline phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus microsporus

人參土成對桿菌Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit拉丁屬名: Dyadobacter ginsengisoli

假單胞菌屬CS (chondroitin sulfate) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas  sp

更新世肉桿菌CG (Chorionic Gonadotrophin) ELISA Kit拉丁屬名: Carnobacterium pleistocenium

奈瑟菌CBX3 (Chromobox Homolog 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Neisseria gonorrhoeae

海南油脂酵母CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Lipomyces hainanensis

大腸埃希氏菌CHD5 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

哈茨木霉CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

熱脫氮地芽孢桿菌熱脫氮亞種CROP (Cisplatin Resistance Associated Overexpressed Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Geobacillus thermodenitrificans subsp. thermodenitrificans

茯苓C-jun ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
羊仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2)  受體相關(guān)因子2抗原王不留行黃酮苷Vaccarin中藥標準品  分 子 式: C32H38O19 分 子 量: 726.63272

TRAF3/CD40bp (CD40 binding protein)  受體相關(guān)蛋白3抗原多聚甲醛溶液(1% PFA)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)  受體相關(guān)因子6抗原升麻酮醇 3-O-alpha-L-拉伯糖苷a-L-Arabinopyranoside, (3b,15a,16a,23R,24S)-16,23:16,24-diepoxy-15,25-dihydroxy-9,19-cyclolanostan-3-yl化學標準品 分 子 式: C35H56O9 分 子 量: 620.81374

TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)  相關(guān)凋亡誘導配體/凋亡素2配體抗原蛻皮激素Hydroxyecdysone中藥標準品  分 子 式: C27H44O7 分 子 量: 480.64

TRBF1 (Telomeric repeat binding factor 1)  端粒體復制結(jié)合因子1抗原磺胺甲噁唑4-Amino-N-(5-methylisoxazol-3-yl)benzenesulfonamide化學標準品 分 子 式: C10H11N3O3S 分 子 量: 253.27764

TRIM32(tripartite motif protein 32)  TRIM32抗原苦參醇X化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

Trop-2/Tpm2 peptide  原肌球蛋白抗原乙酰烏頭堿Acetylaconitine化學標準品 分 子 式: C36H49NO12 分 子 量: 687.77