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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

微黃綠鏈霉菌Ext-N (N-Terminal Extein) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces flavidovirens

炭黑曲霉N-MID-OT (N-MID Osteocalcin) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus carbonarius

多產色鏈霉菌PTPRN (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces polychromogenes

喬木鏈格孢Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Alternaria arborescens

污黑腐皮殼GAS (N-Acetylgalactosamine 6-Sulfatase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

樹舌PTPRO (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type O) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

米根霉P27 (P27 Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  oryzae

藍微褐鏈霉菌TP53 (Tumor Protein p53) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces cyaneofuscatus

膠孢PDAP1 (Pdgfa Associated Protein 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

孢木霉PDCN (Podocin) ELISA Kit拉丁屬名: T.chlorosporum

長孺孢Preptin ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

灰色產色鏈霉菌P-Cadherin (Cadherin, Placental) ELISA Kit用途: Produces blasticidin A, B, C, blasticidin S, cytomycin (U.S. Pat. 3,183,153), toyokamycine. Transformation of benzodiazepine compounds (U.S. Pat. 3,806,418)

星孢毛銹傘P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

鏈格孢SELP (P-Selectin) ELISA Kit 拉丁屬名: Alternaria alternata (Fr.) Keissl.

固氮菌RAPGEF1 (Rap Guanine Nucleotide Exchange Factor 1) ELISA Kit 用途: 固氮。
邊緣無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒 ATF6(activating transcription factor 6)  活化轉錄因子6抗原3-O-順式對香豆酰委陵菜酸3-O-cis-p-coumaroyltormentic acid化學標準品 分 子 式: C39H54O7 分 子 量: 634.842

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)  鈉鉀ATP酶通道蛋白抗原鹽酸小檗胺BERBAMINE DIHYDROCHLORIDE中藥標準品  分 子 式: C17H18N2.2[HCl] 分 子 量: 323.2601

Kir6.2 peptide  ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗原異隱丹參酮Phenanthro[3,2-b]furan-7,11-dione,1,2,3,4,8,9-hexahydro-4,4,8-trimethyl-, (8S)-化學標準品 分 子 式: C19H20O3 分 子 量: 296.3603

AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)  精氨酸加壓素受體2抗原柯里拉京corilagin中藥標準品  分 子 式: C27H22O18 分 子 量: 634.45

Aurora B  極光激酶B抗原尿苷Uridine中藥標準品  分 子 式: C9H12N2O6 分 子 量: 244.20138

Nociceptin  孤菲肽（痛敏肽）（抗原）左旋箭毒堿chondodendrine中藥標準品  分 子 式: C36H38N2O6 分 子 量: 594.69672

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1)  程序性死亡配體1（多肽）地芰普內酯2(4H)-Benzofuranone,5,6,7,7a-tetrahydro-6-hydroxy-4,4,7a-trimethyl-, (6S,7aR)-化學標準品 分 子 式: C11H16O3 分 子 量: 196.24294