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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

油橄欖生曲霉CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus olivicola

分枝農(nóng)霉菌CA3 (Carbonic Anhydrase III, Muscle Specific) ELISA Kit拉丁屬名: Agromyces ramosus

楚氏喜鹽芽孢桿菌AIRA (Anti-Insulin Receptor Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Halobacillus trueperi

芽孢桿菌CYP1A1 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  atrophaeus

山扁豆生棒孢CYP1A2 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

瑞氏青霉AKA (Anti-Keratin Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium  raistrickii

大麗花輪枝孢DCLK1 (Doublecortin Like Kinase 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

葡枝根霉DPYD (Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  stolonifer

研究團隊節(jié)桿菌DSE (Dermatan Sulfate Epimerase) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter arilaitensis

芽孢八疊球菌屬EPYC (Epiphycan) ELISA Kit拉丁屬名: Sporosarcina  sp.

乳酒假絲酵母FABP8 (Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin) ELISA Kit拉丁屬名: Candida  kefyr

玫煙色棒束孢FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit拉丁屬名: Isaria fumosorosea

秀珍菇FAIM3 (Fas Apoptotic Inhibitory Molecule 3) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

冷溫木拉克酵母FASN (Fatty Acid Synthase) ELISA Kit拉丁屬名: Mrakia frigida

樹脂殼菌FBLN4 (Fibulin 4) ELISA Kit拉丁屬名: Resinicium granulare
衣氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格CKLF1  趨化素樣蛋白5,7-二羥基色原酮 7-蕓香糖苷5,7-Dihydroxychromone 7-rutinoside化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

ART(Artemin)(抗原)  馬兜鈴酸CAristolochic acid C中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C16H9NO7 分 子 量: 327.24516

AATK peptide  細胞凋亡關(guān)聯(lián)酪氨酸激酶抗原人參皂苷Rh1Ginsenoside Rh1中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C36H62O9 分 子 量: 638.87208

AQP-2 (aquaporin Protein-2)  水通道蛋白-2（抗原）甘草黃酮C4',5,7-trihydroxy-8-prenylflavone化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H18O5 分 子 量: 338.35392

ABCA1(ATP binding cassette transporter A1)  腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗原乙酰胺Acetamide對照藥材 分 子 式: C2H5NO 分 子 量: 59.0672

TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑巖大戟內(nèi)酯BJolkinolide B中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H35N3O.2[HNO2] 分 子 量: 439.54898

GLUT12  葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白12胭脂蟲酸3-(Benzoyloxy)-2-(methoxycarbonyl)-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylic acid對照藥材 分 子 式: C17H19NO6 分 子 量: 333.33586