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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

枝狀枝孢LN (Laminin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

中國節(jié)叢孢COL1 (Collagen Type I) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobotrys sinensis

麥?zhǔn)辖惶鎲伟?/span>MMP-25 (Matrix Metalloproteinase 25) ELISA Kit拉丁屬名: Alteromonas macleodii

嗜管歐文氏菌MMP-10 (Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

豬絲菌MMP-12 (Matrix Metalloproteinase 12) ELISA Kit拉丁屬名: rhuriopathiae

棒曲霉MMP-13 (Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus clavatus

變平滑假絲酵母sICAM-1/CD54 (Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida metapsilosis

黑木耳8808CT (Calcitonin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

空腸彎曲桿菌ACTH (Adrenocorticotropic Hormone) ELISA Kit拉丁屬名: jejuni

釀酒酵母ACAT2 (Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

高粱生平臍蠕孢PRL (Prolactin) ELISA Kit拉丁屬名: Bipolaris sorghicola

糞腸球菌MYO (Myoglobin) ELISA Kit拉丁屬名: Enterococcus faecalis

彩色豆馬勃Tn-T (Troponin T) ELISA Kit用途: 幼可食、菌根菌

黑曲霉Tn-I (Troponin I) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

大腸埃希氏菌PAPPA (Pregnancy Associated Plasma Protein A) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli
無色桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格Biotin/BSA  生物素偶聯(lián)牛血清白蛋白白果酸(Z)-2-Hydroxy-6-(pentadec-8-en-1-yl)benzoic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C22H34O3 分 子 量: 346.50356

ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39)  促腎上腺皮質(zhì)激素（18-39）(抗原)咪唑溶液(1mol/L)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SP (Substance P)  P物質(zhì)（抗原）改良Barth溶液(無鈣)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Ghrelin  腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)多肽抗原肉豆蔻醚Myristicin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C11H12O3 分 子 量: 192.21

Gastrin(human)peptide(1-17)  胃泌素/蛙皮素（多肽人源）北升麻寧b-D-Glucopyranoside,2-hydroxy-5-(2-hydroxyethyl)phenyl對照藥材 分 子 式: C14H20O8 分 子 量: 316.3038

myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP)  外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原仙茅苷curculigoside中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C22H26O11 分 子 量: 466.44

Insulin protein (from porcine pancreas)  豬仙鶴草內(nèi)酯-6-O-葡萄糖甙1H-2-Benzopyran-1-one, 6-(beta-D-glucopyranosyloxy)-3,4-dihydro-8-hydroxy-3-(2-(4-methoxyphenyl)ethyl)-, (S)-對照藥材 分 子 式: C24H28O10 分 子 量: 476.47312