宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)實(shí)驗(yàn)操作細(xì)則：

一、 樣本處理：
1.   取 100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中，加入 10ul 5M  NaCl  溶液，用渦旋      振 蕩器充分震蕩 10 秒；
2.   加入 10ul 蛋白酶 K，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒；
3.   配制新鮮的裂解液，其組成為： 130ul  裂解液/100ul  樣本， 9ul  肝糖原/100  樣本， 0.2ul tRNA/100ul 樣本，充分混勻以制成新鮮配制的裂解液；
4.  將 139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中， 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒， 取出短 暫快速離心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘；
二、 DNA 捕獲：
1.     將磁珠充分渦旋振蕩以完全重懸；
2.     將樣本管從孵育器中取出， 進(jìn)行簡(jiǎn)短的離心，將液體收集到管底，然后加入完全重懸的 磁珠 60ul 和 230ul 結(jié)合液，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒； (注意： 在加入磁珠時(shí)， 需經(jīng) 常振蕩重懸磁珠， 以保證吸取時(shí)磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后， 重懸磁珠后再進(jìn)行 后續(xù)樣本的添加)
3.     將震蕩后的樣本管，置于旋轉(zhuǎn)混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進(jìn)行磁珠捕獲；
4.     將樣本管從旋轉(zhuǎn)混勻器上取下，在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集；
5.     將離心后的樣本管置于磁力架上， 待溶液完全澄清后， 用槍頭小心移去上清(注： 避免 槍頭攪動(dòng)磁珠，使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率)；
三、 洗滌：
1.     樣本管移去上清后，不必將樣本管從磁力架上取下，直接加入 400ul 洗滌液；
2.     待溶液完全澄清后，磁珠完全分離，用槍頭小心移去上清；
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA Kit
人阿米巴(Amebiasis)ELISA Kit
人白喉抗體(Diphtheria Ab)ELISA Kit
人囊蟲(chóng)病抗體(CYT Ab)ELISA Kit
人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA Kit
人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA Kit
人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA Kit
人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)ELISA Kit
人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM )ELISA Kit
人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgM ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgG ELISA Kit
人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA Kit
人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA Kit
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA Kit
人利什曼原蟲(chóng)抗體(Leishimaria Ab)ELISA Kit
人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA Kit
人流感病毒抗體IgG(FLU)ELISA Kit
人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA Kit
人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA Kit
人輪狀病毒(RV)IgM ELISA Kit
人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA Kit
人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV)ELISA Kit
人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA Kit
人柯薩奇病毒IgM(Cox V-IgM)ELISA Kit


3.     保持樣本管在磁力架上， 加入 400ul 洗滌液， 待溶液澄清， 磁珠完全分離后， 用槍頭小 心移去上清；
4.     將樣本管從磁力架上取下， 于 10000g 的條件下離心 30 秒，使得殘留的洗滌液完全聚集 到管底；
5.     將樣本管置于磁力架上，待磁珠完全分離后，用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體；
6.     將樣本管從磁力架上取下，置于 70oC 金屬浴中，放置 4 分鐘， 除去殘留的乙醇(注： 若干燥不夠， 殘留的乙醇會(huì)影響后續(xù)的定量檢測(cè)反應(yīng))；待磁珠團(tuán)出現(xiàn)裂紋時(shí)，將樣本管從 金屬浴中取出進(jìn)行 DNA 洗脫；
四、 DNA 洗脫：
1.     沿著樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液，用 100ul 的槍頭反復(fù)吹吸，以完全重懸磁珠；
2.     將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘；
3.     將樣本管從孵育器中取出，于 20000g 離心 2 分鐘，然后至于磁力架上，待磁珠完全分 離后，用 10ul 槍頭小心將上清液體轉(zhuǎn)移至新的干凈的離心管中；
4.      為了避免吸入磁珠，在離心管中還剩余少量液體時(shí)，將其于 20000g 離心 2 分鐘，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體。